Andriani,, Carissa Evanti (2024) Preparasi, Karakterisasi, dan Evaluasi In-Vitro Liposom Berbasis Peptida Nuclear Localization Sequence (PKKKRKV) Sebagai Kandidat Agen Transfeksi. Undergraduate thesis, Fakultas Sains dan Matematika Undip.

	Archive Carissa Evanti Andriani.zip Restricted to Repository staff only Download (8MB) | Request a copy
	Text 1. COVER.pdf Download (195kB)
	Text 3. HALAMAN PENGESAHAN.pdf Restricted to Repository staff only Download (240kB) | Request a copy
	Text 5. ABSTRAK.pdf Download (299kB)
	Text 6. ABSTRACT.pdf Download (186kB)
	Text 7. DAFTAR ISI.pdf Download (193kB)
	Text 10. BAB I PENDAHULUAN.pdf Download (408kB)
	Text 15. DAFTAR PUSTAKA.pdf Download (454kB)

Abstract

Adanya penyakit yang tidak dapat disembuhkan oleh metode konvensional seperti
berbagai penyakit gangguan neurodegeneratif mendorong solusi terapi gen yang
melibatkan penghantaran gen terapeutik. Vektor viral terlibat dalam 67% uji klinis
terapi gen karena efektivitasnya yang tinggi namun diikuti risiko toksisitas yang
tinggi pula. Vektor non-viral konvensional menjadi salah satu alternatif kendaraan
penghantaran gen dengan modifikasi komponen fungsional peptida NLS (Nuclear
Localization Sequence) sebagai pengarah masuknya DNA ke dalam nukleus untuk
meningkatkan ekspresi gen. Penelitian dilakukan dengan tujuan mengetahui
kemampuan liposom berbasis peptida NLS dalam mengkondensasi dan
melindungi materi genetik dan degradasi enzim, mengetahui efektivitas ekspresi
gen melalui transfeksi ke galur sel HEK-293T, dan mengetahui tingkat
toksisitasnya. Metode yang dilakukan antara lain, pembuatan sel kompeten E. coli
TOP10, transformasi dan isolasi plasmid pCSII- EF-AcGFP yang mengkode
green fluorescence protein, konfirmasi plasmid sebagai uji validitas, preparasi
liposom berbasis peptida NLS dengan metode dispersi dan injeksi etanol, uji
mobilitas dan uji stabilitas kompleks DNA-liposom, pemeliharaan galur sel HEK-
293T, transfeksi, dan uji sitotoksisitas dengan metode MTT viability assay.
Liposom berbasis DOTAP:kolesterol (perbandingan molar 3:1) dan peptida NLS
menunjukkan kemampuan mengkondensasi dan melindungi DNA dari degradasi
enzim DNase dengan metode EMSA serta menunjukkan tingkat ekspresi gen
mendekati kontrol PEI-25K secara kualitatif melalui pendaran green fluorescence
protein. Liposom berbasis peptida NLS juga menunjukkan rentang toksisitas tidak
toksik (≥80% viabilitas sel) hingga tingkat toksisitas lemah (60%-80% viabilitas
sel). Liposom berbasis DOTAP:kolesterol (perbandingan molar 3:1) dan peptida
NLS 16 µmol merupakan agen transfeksi yang ideal, antara lain efektivitas
ekspresi gen yang tinggi dengan toksisitas lemah.
Kata Kunci: in-vitro, liposom, peptida, toksisitas, transfeksi

Actions (login required)

View Item