Savitri, Danti Nur (2026) Optimasi Produksi Enzim Laktat Dehidrogenase Rekombinan dalam Escherichia coli BL21 (DE3) melalui Variasi Suhu, Konsentrasi Inducer, dan Waktu Pascainduksi. Undergraduate thesis, Fakultas Sains dan Matematika Undip.

	Text 1. COVER.pdf Download (457kB)
	Text 4. ABSTRAK.pdf Download (530kB)
	Text 5. ABSTRACT.pdf Download (531kB)
	Text 6. DAFTAR ISI.pdf Download (163kB)
	Text 10. BAB I PENDAHULUAN.pdf Download (232kB)
	Text 15. DAFTAR PUSTAKA.pdf Download (284kB)

Abstract

Laktat dehidrogenase (LDH) merupakan enzim yang berperan penting dalam
biosintesis asam laktat, sehingga diperlukan strategi produksi yang dapat
menghasilkan enzim ini dalam jumlah tinggi dan aktif secara katalitik. Penelitian
ini dilakukan untuk menganalisis pengaruh suhu, konsentrasi IPTG, dan waktu
pascainduksi terhadap produksi D-LDH dan L-LDH rekombinan Pediococcus
pentosaceus InaCC B159, mengetahui kondisi produksi optimum, mengevaluasi
aktivitas enzimatik, serta mengevaluasi pengaruh penyisipan gen ldhD dan ldhL
terhadap produksi asam laktat pada E. coli BL21(DE3). Gen ldhD dan ldhL
diekspresikan menggunakan plasmid pET-28a(+) pada E. coli BL21 (DE3). Tahap
optimasi produksi dilakukan melalui variasi suhu (25 °C, 30 °C, 37 °C), konsentrasi
IPTG (0,5 mM, 1 mM, dan 2 mM), dan waktu pascainduksi (12 jam, 18 jam, dan
24 jam) dengan penambahan kontrol tanpa induksi dan kontrol tanpa gen target
pada setiap tahap optimasi. Setiap tahap optimasi terdiri atas lima kelompok dengan
masing-masing tiga ulangan yang disusun menggunakan Rancangan Acak Lengkap
(RAL). Pengukuran kadar laktat dilakukan pada setiap kultur (E. coli BL21(DE3)-
pET-28a-ldhD, E. coli BL21(DE3)-pET-28a-ldhL, E. coli BL21(DE3)-pET-28a-
(+)) dengan masing-masing tiga ulangan dilakukan pada jam ke 0, 9, dan 48.
Analisis protein dilakukan dengan SDS-PAGE dan BCA assay, serta aktivitas
enzim diukur berdasarkan perubahan piruvat menjadi laktat. Hasil penelitian
menunjukkan suhu, konsentrasi IPTG, dan waktu pascainduksi memengaruhi
produksi protein rekombinan. Kondisi optimum produksi D-LDH diperoleh pada
suhu 25°C, konsentrasi IPTG 0,5 mM, dan waktu pascainduksi 18 jam, sedangkan
L-LDH pada 25°C, 1 mM IPTG, dan 18 jam pascainduksi. Kedua memiliki aktivitas
enzim sebesar 5,88 U/mL dengan aktivitas spesifik 0,30 U/mg untuk D-LDH dan
8,62 U/mL dengan aktivitas spesifik 0,36 U/mg untuk L-LDH. Penyisipan gen
ldhD dan ldhL meningkatkan produksi asam laktat dibandingkan kontrol, dengan
produksi D-laktat sebesar 1,041 g/L dan L-laktat sebesar 0,636 g/L.

(NO KETERSEDIAAN : 2304/B/2026)

Actions (login required)

View Item