Sari, Ariestya Indah Permata and Mundhofir, Farmaditya EP and Faradz, Sultana MH (2014) ANALISIS EKSPRESI PROTEIN CFTR PADA MUTASI MISSENSE c.965T>C (p.Val322Ala atau V322A). Masters thesis, Universitas Diponegoro.

	Text (COVER) Halaman Judul.pdf Download (367kB)
	Text (BAB 1) Bab 1.pdf Download (138kB)
	Text (BAB 2) Bab 2.pdf Restricted to Registered users only Download (1MB)
	Text (BAB 3) Bab 3.pdf Restricted to Registered users only Download (8kB)
	Text (BAB 4) Bab 4.pdf Restricted to Registered users only Download (343kB)
	Text (BAB 5) Bab 5.pdf Restricted to Registered users only Download (860kB)
	Text (BAB 6) Bab 6.pdf Restricted to Registered users only Download (281kB)
	Text (BAB 7) Bab 7.pdf Restricted to Registered users only Download (107kB)
	Text (Daftar Pustaka - Lampiran) Dapus + Lampiran.pdf Restricted to Registered users only Download (359kB)

Abstract

Latar Belakang: Cystic fibrosis (CF) atau fibrosis kistik adalah penyakit genetik autosomal resesif langka yang paling sering dijumpai pada populasi Kaukasia. CF dilatarbelakangi oleh mutasi gen Cystic Fibrosis Transmembrane conductance Regulator (CFTR). Mutasi missense adalah mutasi yang terbanyak ditemukan. Mutasi missense c.965T>C (p.Val322Ala atau V322A) merupakan mutasi yang belum diketahui efeknya terhadap protein CFTR. Penelusuran prediksi protein dengan software Polyphen-2 dan SWISS Model menunjukkan hasil yang berbeda sehingga analisis ekspresi protein CFTR V322A penting dilakukan untuk melihat efek substitusi asam amino tersebut.
Metode: Penelitian eksperimental menggunakan plasmid CFTR wild type yang dimutagenesis untuk mendapatkan mutasi V322A dan ditransformasi ke bakteri E. coli DH5α untuk mendapatkan plasmid dalam jumlah besar. Plasmid ditransfeksi ke dua macam galur sel: sel HeLa dan sel HEK293 agar dapat mengekspresikan protein. Analisis ekspresi protein CFTR dilakukan melalui tiga pendekatan: maturasi, identifikasi lokasi, dan tes aktivitas kanal CFTR. Studi maturasi protein dilakukan dengan Western blot sedangkan analisis lokalisasi protein dilakukan dengan imunofluoresen yang diamati dengan mikroskop konfokal.
Hasil: Analisis maturasi protein CFTR pada mutasi V322A menunjukkan derajat glikosilasi yang normal seperti pada protein CFTR wild type. Penciteraan fluoresen dari CFTR V322A menunjukkan lokalisasi protein yang normal di membran sel. Tes
aktivitas kanal CFTR V322A yang belum selesai diperkirakan normal.
Kesimpulan: Protein CFTR dari mutasi c.965T>C (p.Val322Ala atau V322A) merupakan protein yang matur dan berlokasi di membran sel sehingga mutasi tersebut dapat dipertimbangkan sebagai variasi normal dari CFTR.
Kata Kunci: Cystic fibrosis; gen CFTR; kanal CFTR

Actions (login required)

View Item